貨號(hào)：SC705011
規(guī)格：50測(cè)試/盒
【產(chǎn)品概述】
核酸水解凝膠電泳法和紫外分光光度計(jì)法是Rnase檢測(cè)領(lǐng)域中比較常用的檢測(cè)方法。核酸水解凝膠電泳法受實(shí)驗(yàn)人員主觀(guān)判斷影響較大，無(wú)法準(zhǔn)確定量，操作時(shí)間長(zhǎng)，測(cè)定通量較低。核酸水解紫外分光光度法的靈敏度低，不適合微量核酸酶殘留的活性檢測(cè)。
本試劑盒以RNA探針為底物，當(dāng)檢品中存在核糖核酸酶時(shí)，RNA探針被降解，標(biāo)記在探針上的熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離（詳見(jiàn)圖1），產(chǎn)生熒光，該方法具有操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好及高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，可根據(jù)需求自由選擇進(jìn)行定性或定量檢測(cè)。
（圖1 檢測(cè)原理圖）
（圖2 RNA酶活性殘留檢測(cè)試劑盒定量標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)曲線(xiàn)圖）
（圖3 RNA酶活性殘留檢測(cè)試劑盒定量標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)）
【產(chǎn)品特點(diǎn)】
1. 簡(jiǎn)便：樣品制備及檢測(cè)操作簡(jiǎn)單，一個(gè)小時(shí)內(nèi)即可得到檢測(cè)結(jié)果。
2. 準(zhǔn)確：試劑盒檢測(cè)原理基于底物RNA探針，無(wú)非特異性交叉反應(yīng)，具有高準(zhǔn)確性的特點(diǎn)。
3. 靈敏：試劑盒具有高靈敏度的特點(diǎn)，可以檢測(cè)低至0.5 ng/ml的RNase樣品。
4. 穩(wěn)定：檢測(cè)過(guò)程于微量PCR管中閉管操作，不受環(huán)境因素影響，結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性高。
5. 靈活：檢測(cè)方式靈活，可根據(jù)需求自由選擇進(jìn)行定性或定量檢測(cè)。
【RNase簡(jiǎn)介】
核糖核酸酶（簡(jiǎn)稱(chēng)RNase）是一類(lèi)能夠催化RNA水解反應(yīng)的酶。RNase在生物體內(nèi)或外源環(huán)境中廣泛存在，能夠?qū)NA進(jìn)行大小、位置不同的切割，解除RNA中的化學(xué)鍵。在生物體內(nèi)，RNase起到調(diào)控RNA代謝、穩(wěn)定性等作用，因此在細(xì)胞內(nèi)RNase活性的調(diào)控和平衡是維護(hù)正常生物功能的必要條件。RNase在生命科學(xué)研究中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，包括基因表達(dá)、RNA質(zhì)量控制、RNA代謝和RNA調(diào)解等方面。
RNase根據(jù)其反應(yīng)機(jī)理和物理性質(zhì)可以分為RNA內(nèi)切酶和RNA外切酶。RNA內(nèi)切酶包括多種不同類(lèi)型的內(nèi)切酶，如RNase T1、RNase T2、RNase A、RNase B、RNase H和RNase P等，可以將RNA分子的主鏈切斷成短鏈和單鏈產(chǎn)物。RNA外切酶可將RNA分子降解為短鏈和單鏈產(chǎn)物，主要包括RNase E、RNase J、RNase III和RNase PH等。
RNase在生物學(xué)研究中起著至關(guān)重要的作用。它可以消除或剪切mRNA中的異常區(qū)域，保證RNA質(zhì)量的穩(wěn)定性和完整性。RNase也可以促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，使得DNA和RNA的信息能夠順利傳導(dǎo)和表達(dá)。此外，RNase在RNA代謝和RNA穩(wěn)定性方面也具有重要作用。在細(xì)胞凋亡過(guò)程中，RNase能夠分解RNA和DNA，起到“自吞噬”的作用。在細(xì)胞生長(zhǎng)和分裂過(guò)程中，RNase直接參與RNA的合成和轉(zhuǎn)錄過(guò)程，進(jìn)而控制基因表達(dá)水平，維持生命的運(yùn)轉(zhuǎn)。
RNase在醫(yī)學(xué)中也有許多應(yīng)用。例如，因?yàn)镽Nase能夠促進(jìn)基因表達(dá)和轉(zhuǎn)錄，它可以用于腫瘤治療中。研究表明，一些腫瘤細(xì)胞中的RNA水平非常高，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和繁殖。因此，使用RNase可以消除多余的RNA，從而抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。其次，RNase還可以用于處理一些遺傳疾病，如囊性纖維化等。通過(guò)將RNase引入患有囊性纖維化的人體內(nèi)，這種疾病對(duì)呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)的嚴(yán)重破壞可以得到一定程度的改善。
【RNase殘留的危害】
（1）實(shí)驗(yàn)室
RNase殘留會(huì)對(duì)分子生物學(xué)分析和實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生嚴(yán)重危害，首先，RNase可以降解RNA，并將其變得不可使用。即使只有微小量的RNase殘留，也可能對(duì)RNA樣本產(chǎn)生嚴(yán)重影響。這將導(dǎo)致假陰性結(jié)果，數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可靠。RNase殘留會(huì)干擾RNA樣本的純化和反轉(zhuǎn)錄過(guò)程，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。在反轉(zhuǎn)錄的過(guò)程中，RNase會(huì)降解RNA，從而使反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中的RNA沒(méi)有被轉(zhuǎn)錄成對(duì)應(yīng)的DNA。RNase在室溫下可存活數(shù)周，這些殘留物可能會(huì)污染實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，如實(shí)驗(yàn)設(shè)備、試劑、手套、實(shí)驗(yàn)服和其他實(shí)驗(yàn)器具。
在實(shí)驗(yàn)室中，為了避免RNase污染，需要特別注意對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的衛(wèi)生管理、器械的消毒、實(shí)驗(yàn)操作員的清潔等方面，使用RNase-free的相關(guān)實(shí)驗(yàn)耗材，以及定期對(duì)環(huán)境和相關(guān)耗材進(jìn)行RNase殘留的監(jiān)控。
（2）生物制品生產(chǎn)企業(yè)
生物制品的生產(chǎn)過(guò)程中存在著多種雜質(zhì)，例如質(zhì)粒DNA、蛋白酶和RNase等。其中RNase活性極強(qiáng)，微量殘留即可導(dǎo)致大量RNA的降解。RNase污染分為內(nèi)源性和外源性?xún)煞N，內(nèi)源性污染指生物樣本中含有的內(nèi)源性RNase，可通過(guò)樣本處理或添加RNase抑制劑/滅活劑來(lái)處理，而外源性污染來(lái)自于環(huán)境中的水、緩沖液、實(shí)驗(yàn)器皿等表面，源頭廣泛，包括微生物、人體毛發(fā)、皮膚碎屑和汗液等。同時(shí)，在部分生物制品的生產(chǎn)工藝流程中也會(huì)添加核酸酶，從而引入外源性核酸酶。
生物制品中殘留的核酸酶會(huì)對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量產(chǎn)生極大影響，以mRNA疫苗的生產(chǎn)為例，在生產(chǎn)過(guò)程中殘留的RNaseA、宿主菌DNA、宿主菌RNA和宿主蛋白等，它們都會(huì)顯著影響體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和轉(zhuǎn)錄mRNA的質(zhì)量，需對(duì)產(chǎn)品的純度進(jìn)行嚴(yán)格的把關(guān)。
我國(guó)在《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》、《人用基因治療制品總論》、《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》等法規(guī)中做出了針對(duì)核酸酶等雜質(zhì)的相關(guān)規(guī)定，此外，歐洲藥品監(jiān)督管理局也出臺(tái)了相應(yīng)的法規(guī)要求。
【應(yīng)用場(chǎng)景】
1）生物耗材RNase殘留檢測(cè)
2）生物試劑RNase殘留檢測(cè)
3）生物制品（疫苗、干細(xì)胞等）RNase殘留檢測(cè)等
【應(yīng)用單位】
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